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酶底物法快速测定地表水中粪大肠菌群的研究
添加时间:2018-03-12
  摘要:采用酶底物法对一地表水水样进行不同倍数的稀释后进行培养检测,并观察结果变化。结果表明,地表水水样稀释倍数越小,检测结果越准确.采用酶底物法测定地表水中的粪大肠菌群具有快速、简便的特点,但测定水样稀释的倍数对其测定结果有一定的影响。
地表水中粪大肠菌群是评价水质受粪便污染程度的重要指标之一,传统检测方法是采用多管发酵法或者滤膜法。但这两种方法检测时间相对较长(48h左右),且需要进行验证实验,实验步骤较为繁琐,所以多管发酵法或者滤膜法不能对水质状况做出快速评价。因此,探索快速简便的检测方法显得十分必要。固定底物技术酶底物法可以较好地弥补传统方法的不足。根据《生活饮用水国家卫生标准》(GB/T5750.12—20061)中推荐的固定底物技术酶底物法,利用西安立科环保科技欢乐城彩票登陆立科酶底物试剂,检测100mL水样,只需手工操作1min,无需无菌实验室,即可在24h内定量检测出水中的粪大肠菌群数。该方法极大地减少了工作量,避免了使用多管法时逐级稀释带来的操作误差,也避免了使用滤膜法时肉眼读数的人为误差。
一、实验部分
实验材料
立科试剂;100mL无菌取样瓶(里面装有1.5%的硫代硫酸钠,用于去除水样中的余氯);无菌培养定量盘(5l孔);立科智能程控定量封口机(带5l孔定量盘橡胶托垫);51孔阳性标准比色盘;便携式培养箱。
二、实验方法
在培养温度为44.5±I℃条件下,粪大肠菌群细菌能特异性地产生β—半乳糖苷酶(β—D—galactosidase),该生物酶可以分解ONPG(Ortho—nitrophenyl—β—D—Ralactopyranoside,β—半乳糖醛苷),使培养液呈黄色。
实验步骤如下:
1)采用100mL无菌取样瓶取100mL混匀水样r如果水样粪大肠菌群数大于2005个/L,则酌情少取,并用新配置的超纯水稀释至100mL刻度线);
2)在装有水样的取样瓶中加立科试剂,充分摇匀,使试剂完全溶解;
3)把溶解完全的水样倒入无菌培养定量盘(51孔);
4)采用带51孔定量盘橡胶托垫在封lZl机上进行封装:
5)把封装好的5l孔定量盘放入44.5±1℃恒温培养箱中培养24h;
6)培养24h后,从培养箱中取出,与5l孔阳性标准比色盘进行比较(黄色孔颜色比51孔阳性标准比色盘深的表明为阳性反应),根据51孔定量盘上的阳性孔数,对照立科公司提供的MPN表,报出结果。
三、统计学分析
数据的整理统计使用execl软件进行。
四、结果与讨论
对同一地表水样进行l~200倍不等的稀释时,测定结果范围在4000个/L-8260个/L之间,偏差较大。
测定结果如表l及图l所示。



由表1和图1可以看出,水样不稀释或者稀释两倍时,51孔定量盘的阳性孔数为51孔,表明该水样的粪大肠菌群浓度大于2005个/L;对水样进行4倍或5倍的稀释培养检测时,51孔定量盘的阳性孔数分别为50孔和49孔,测定结果值为8020个/L和8260个/L,两者的平均偏差为1.5%。该结果与传统的多管发酵法的实验结果具有较好的一致性,结果可信。而对该水样进行10-200倍不等得稀释时。检测结果值在7820个/L-4000个/L之间,结果均偏低。由此可知,稀释倍数越高,测定结果值就越偏低。因此,在日常检测工作中,检测人员应根据具体情况对水样进行最小倍数的稀释。
五、结语
酶底物法测定水样中的粪大肠菌群具有快速、简便、准确的特点。无需清洗玻璃器皿,无需无菌室,无需配置培养基,24h出结果,能够较为准确地判断水样的污染状况。但测定水样的稀释倍数对其测定结果有一定的影响,检测人员应根据具体情况对水样进行最小倍数的稀释,使结果更加准确真实。
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